Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
Прямое измерение даёт величину:
АА = Al - Ar
AA - оптическая плотность кругового дихроизма,
Al - оптическая плотность для света с левой круговой поляризацией,
Ar - оптическая плотность для света с правой круговой поляризацией.
Круговой дихроизм рассчитывают по уравнению:
А? = ? l - ?R =----
С X l
Ae - молярный круговой дихроизм или молярный дифференциальный
дихроичный коэффициент поглощения, выраженный в л-моль-1 -см-1,
?і_ - молярный коэффициент поглощения (2.2.25) для света с левой круговой
поляризацией,
er - молярный коэффициент поглощения для света с правой круговой
поляризацией,
-1
c - концентрация вещества в исследуемом растворе в моль-л ,
l - длина оптического пути в сантиметрах.
Для характеристики кругового дихроизма могут быть также использованы следующие единицы:
Фактор диссимметрии:
А? g = — ?
e - молярный коэффициент поглощения (2.2.25).
Молярная эллиптичность:
Некоторые типы приборов непосредственно показывают величину эллиптичности 0, выраженную в градусах. При использовании таких приборов молярная эллиптичность [0] может быть рассчитана по следующему уравнению:
с x l x 10
[0] - молярная эллиптичность, выраженная в градус-см2-децимоль-1,
0 - величина эллиптичности, показываемая прибором,
M - относительная молекулярная масса исследуемого вещества, c - концентрация исследуемого вещества в растворе в г/мл,
1 - длина оптического пути в сантиметрах.
Молярная эллиптичность также связана с молярным круговым дихроизмом следующим уравнением:
[0] = 2,303А? 4500 » 3300А? p
Молярная эллиптичность часто используется при анализе белков и нуклеиновых кислот. В этом случае молярная концентрация, выраженная в единицах мономерных остатков, рассчитывается, исходя из выражения:
молекулярная масса число аминокислот
Для белков среднее значение относительной молекулярной массы мономерного остатка составляет от 100 до 120 (в среднем 115), для нуклеиновых кислот (в виде натриевой соли) - около 330.
Прибор. Источником света (S) является ксеноновая лампа (Рис. 2.2.41.-1); свет проходит через двойной монохроматор (M), снабжённый кварцевыми призмами (P1, P2).
Рис. 2.2.41 .-1. - Оптическая схема дихрографа
Линейный луч из первого монохроматора расщепляется на два компонента, поляризуемые под правым углом вторым монохроматором. Дополнительный луч устраняется выходной щелью монохроматора.
Поляризованный и монохроматический свет проходит через двоякопреломляющий модулятор (Cr): в результате образуется переменный свет с круговой поляризацией.
Затем луч проходит через исследуемый образец (C) и попадает на фотоумножитель (PM), за которым следует усилитель, производящий два электрических сигнала: один постоянного тока Vc, а другой переменного тока с частотой модуляции Vac характерной для исследуемого образца. Фаза является показателем кругового дихроизма. Отношение Vac/Vc пропорционально дифференциальной оптической плотности AA, которая создаётся сигналом. Дихрограф обычно позволяет проводить измерения в диапазоне длин волн от 170 до 800 нм.
Градуировка прибора. Точность шкалы оптической плотности. Растворяют 10,0 мг изоандростерона R в диоксане R и доводят до 10,0 мл этим же растворителем. Снимают спектр кругового дихроизма раствора в диапазоне от 280 нм до 360 нм. Величина Де, измеренная в максимуме при 304 нм, равна + 3,3.
Также может быть использован раствор (1S^)-(+)-10-камфорсульфоновой кислоты
R.
Линейность модуляции. Растворяют 10,0 мг 1S^)-(+)-10-камфорсульфоновой кислоты R в воде R и доводят этим же растворителем до 10,0 мл. Определяют точную концентрацию камфорсульфоновой кислоты в растворе методом УФ-спектрофотометрии (2.2.25), используя величину удельного показателя поглощения при 285 нм, равную 1,49.
Снимают спектр кругового дихроизма раствора в диапазоне от 185 нм до 340 нм. Величина Де, измеренная в максимуме при 290,5 нм, равна от + 2,2 до + 2,5, а измеренная в максимуме при 192,5 нм - от - 4,3 до - 5.
Может быть использован (1S)-(+)- или его оптический изомер -(1R)-(+)-камфорсульфонат аммония R.
2.2.42. Плотность твердых тел
Плотность твердых тел соответствует их средней массе единицы объема и обычно выражается в граммах на сантиметр кубический (г/см3), хотя международной единицей является килограмм на метр кубический (1 г/см3=1000 кг/м3).
В отличие от газов и жидкостей, плотность которых определятся только температурой и давлением, плотность твердых тел зависит также от строения молекул и поэтому изменяется в зависимости от структуры кристалла и степени кристалличности.
